昆明诺金科技有限公司生产销售鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断试剂盒说明书(20次) 山东绿都动物疫病检测试剂盒 PCR试剂盒厂家
鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断试剂盒说明书(20次)
[注意] 用前请认真阅读注意事项。
[用途] 用于鸡传染性喉气管炎病毒的检测、诊断和流行病学调查。
[试剂]
编号
数量
保存
SR-I
1.2mL
室温
SR-II
65μl
-20℃
SR-Ⅲ
900μl
4℃
TU-1
110μl
TU-2
80μl
TU-3
22μl
TU-4
TU-5
1.0mL
TU-6
10μl
TU-7
30μl
TU-8
60μl
TU-9
T
[操作步骤]
1. 病料处理:
取适量病料鼻、气管、支气管和喉部等组织,于灭菌研钵充分研磨,用PBS液按照1:5稀释成均匀乳剂,-20℃反复冻融3次以上。
2 . DNA的抽提
(1) 取已冻融好的病料,8000r/min离心5min,取上清(或T,T为质控样品)447μl,加50μl SR-I和3μl SR-II,50℃水浴1-2h,并不时颠倒混匀一下。
(2) 加入等量酚:氯仿(1:1),漩涡振荡20秒,4℃,12000r/min,离心5min。
(3) 取上清,加入等量氯仿,振荡混匀,4℃,12000r/min,离心5min。
(4) 取400μl上清,加入800μl无水乙醇,再加40μl SR-III,混匀。-20℃放置30~120min,4℃、12000r/min,离心10min,小心弃上清,沉淀即为DNA。用75%乙醇(灭菌双蒸水配,每次加入500μl)洗涤2次,小心吸去75%乙醇,勿使DNA丢失,室温晾干或净工作台风干15-25min,加入15μl TU-5溶解即为模板,即用或-20℃保存备用。
3.PCR操作
加样体系:(将下列试剂加入0.5mLPCR反应管中,好在冰浴条件下加样。
反应条件:
4.电泳:
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1μl的TU-9混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物6μl混合1.5μl TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加入3μl TU-8,在100V 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。
100bp
250bp
500bp
750bp
1000bp
2000bp
1 2 3
295 bp
[注意事项]
1. 每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2. 本试剂盒为20头份量试剂,操作失误或移液器不准确造成终剂量不够情况,不予负责。
3. 所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。
4. 尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染。
5. 加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不、定时不准确造成无结果情况,不予负责。
6. 吸头、离心管和PCR管在使用前,要高压灭菌,操作过程尽量不要用手接触到管内壁,可用镊子夹取。
7. 注意防止试剂污染,在有效期限前用完。
8. TU-9所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤。如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗。
[有效期]
本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面。
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鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断试剂盒说明书(20次)
[注意] 用前请认真阅读注意事项。
[用途] 用于鸡传染性喉气管炎病毒的检测、诊断和流行病学调查。
[试剂]
编号
数量
保存
SR-I
1.2mL
室温
SR-II
65μl
-20℃
SR-Ⅲ
900μl
4℃
TU-1
110μl
-20℃
TU-2
80μl
-20℃
TU-3
22μl
-20℃
TU-4
22μl
-20℃
TU-5
1.0mL
-20℃
TU-6
10μl
-20℃
TU-7
30μl
-20℃
TU-8
60μl
-20℃
TU-9
30μl
4℃
T
1.0mL
-20℃
[操作步骤]
1. 病料处理:
取适量病料鼻、气管、支气管和喉部等组织,于灭菌研钵充分研磨,用PBS液按照1:5稀释成均匀乳剂,-20℃反复冻融3次以上。
2 . DNA的抽提
(1) 取已冻融好的病料,8000r/min离心5min,取上清(或T,T为质控样品)447μl,加50μl SR-I和3μl SR-II,50℃水浴1-2h,并不时颠倒混匀一下。
(2) 加入等量酚:氯仿(1:1),漩涡振荡20秒,4℃,12000r/min,离心5min。
(3) 取上清,加入等量氯仿,振荡混匀,4℃,12000r/min,离心5min。
(4) 取400μl上清,加入800μl无水乙醇,再加40μl SR-III,混匀。-20℃放置30~120min,4℃、12000r/min,离心10min,小心弃上清,沉淀即为DNA。用75%乙醇(灭菌双蒸水配,每次加入500μl)洗涤2次,小心吸去75%乙醇,勿使DNA丢失,室温晾干或净工作台风干15-25min,加入15μl TU-5溶解即为模板,即用或-20℃保存备用。
3.PCR操作
加样体系:(将下列试剂加入0.5mLPCR反应管中,好在冰浴条件下加样。
反应条件:
4.电泳:
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1μl的TU-9混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物6μl混合1.5μl TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加入3μl TU-8,在100V 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。
100bp
250bp
500bp
750bp
1000bp
2000bp
1 2 3
295 bp
[注意事项]
1. 每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2. 本试剂盒为20头份量试剂,操作失误或移液器不准确造成终剂量不够情况,不予负责。
3. 所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。
4. 尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染。
5. 加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不、定时不准确造成无结果情况,不予负责。
6. 吸头、离心管和PCR管在使用前,要高压灭菌,操作过程尽量不要用手接触到管内壁,可用镊子夹取。
7. 注意防止试剂污染,在有效期限前用完。
8. TU-9所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤。如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗。
[有效期]
本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面。