昆明诺金科技有限公司生产销售云南猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒说明书(20次) 绿都生物动物疫病PCR试剂盒 绿都生物动物疫病PCR试剂盒 养殖场屠宰场动物疫病检测试剂盒厂家
猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒说明书(20次) 【注意】接到货后请认真阅读注意事项。 【用途】用于猪传染性胃肠炎病毒病的检测、诊断和流行病学调查。 【试剂】 编号 数量 保存 SR-I 8mL 4℃ SR-II 14mL 4℃ TU-1 250uL -20℃ TU-2 20uL -20℃ TU-3 20uL -20℃ TU-4 20uL -20℃ TU-5 500uL -20℃ TU-6 60uL -20℃ TU-7 25uL 4℃ TU-8 30uL 4℃ T 500 uL -20℃ 【操作步骤】 1.RNA提取 (1)取疑似猪传染性胃肠炎病毒病的病料(空肠、小肠及其内容物等),用Hank’s液或PBS研磨成1:3悬液,在-20 ℃反复冻融3次,经3 000 r/min离心5 分钟,上清液再经12 000 r/min离心15分钟,上清液-70 ℃保存备用。 (2)取200uL上清液(或标准品T),移入新的1.5mL灭菌EP管中,加入400uLSR-I,反复颠倒几次混匀,室温放置5~10分钟。 (3)加入200uL氯仿,漩涡振荡15秒混匀。室温下放置2~3分钟。 (4)12000r/min离心10分钟,取上层水相(注意:切勿吸取到里两相之间的杂质),转移到一个新的EP管中,再加入等体积异丙醇混匀,室温放置10分钟。 (5)12000r/min离心10分钟,弃去上清,加入SR-II 700uL,充分洗涤沉淀RNA后,12000r/min离心5分钟,小心吸去上清(注意:严格防止RNA丢失)。 (6)用洁净吸水纸吸干管壁的SR-II,室温放置2~3分钟。用20uLTU-5溶解,即为模板,即用或-70℃冻存备用。 2.One-Step RT- PCR加样体系 TU-1 12.5uL TU-2 1uL TU-3 1uL TU-4 1uL 模 板 9.5uL 3.反应程序 第1步 50℃ 45min 第2步 第3步 94℃预变性 94℃变性 5min 1min 第4步 58℃退火 1min 30个循环(3~5步) 第5步 72℃延伸 1min 第6步 72℃延伸 6min 第7步 4℃终止 5min 4.电泳 称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5uL的TU-8混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物5uL混合1uL TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加3uLTU-6,在120v 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。 【结果判定】 在约1128bp位置出现扩增带,实验结果为阳性(如图)。 1.DL2000 Marker 2.标准阳性片段 【注意事项】 1.每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。 2.本试剂盒为20头份量诊断试剂,操作失误或移液器不准确造成终剂量不够情况,不予负责。 3.所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。 4.尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染,RNA抽提严格防止RNA酶污染,要求戴一次性塑料手套,并经常更换。 5.加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不、定时不准确造成无结果情况,不予负责。 6. 枪头、离心管和PCR管在使用前,好用DEPC水(0.1%)处理,然后高压灭菌后烘干,操作过程尽量不要用手接触,可用镊子夹取。 7.注意防止试剂污染,在有效期限前用完。 8. TU-8所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤。如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗。 【有效期】 本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面。
猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒说明书(20次)
【注意】接到货后请认真阅读注意事项。
【用途】用于猪传染性胃肠炎病毒病的检测、诊断和流行病学调查。
【试剂】
编号
数量
保存
SR-I
8mL
4℃
SR-II
14mL
TU-1
250uL
-20℃
TU-2
20uL
TU-3
TU-4
TU-5
500uL
TU-6
60uL
TU-7
25uL
TU-8
30uL
T
500 uL
【操作步骤】
1.RNA提取
(1)取疑似猪传染性胃肠炎病毒病的病料(空肠、小肠及其内容物等),用Hank’s液或PBS研磨成1:3悬液,在-20 ℃反复冻融3次,经3 000 r/min离心5 分钟,上清液再经12 000 r/min离心15分钟,上清液-70 ℃保存备用。
(2)取200uL上清液(或标准品T),移入新的1.5mL灭菌EP管中,加入400uLSR-I,反复颠倒几次混匀,室温放置5~10分钟。
(3)加入200uL氯仿,漩涡振荡15秒混匀。室温下放置2~3分钟。
(4)12000r/min离心10分钟,取上层水相(注意:切勿吸取到里两相之间的杂质),转移到一个新的EP管中,再加入等体积异丙醇混匀,室温放置10分钟。
(5)12000r/min离心10分钟,弃去上清,加入SR-II 700uL,充分洗涤沉淀RNA后,12000r/min离心5分钟,小心吸去上清(注意:严格防止RNA丢失)。
(6)用洁净吸水纸吸干管壁的SR-II,室温放置2~3分钟。用20uLTU-5溶解,即为模板,即用或-70℃冻存备用。
2.One-Step RT- PCR加样体系
12.5uL
1uL
模 板
9.5uL
3.反应程序
第1步
50℃
45min
第2步
第3步
94℃预变性
94℃变性
5min
1min
第4步
58℃退火
30个循环(3~5步)
第5步
72℃延伸
第6步
6min
第7步
4℃终止
4.电泳
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5uL的TU-8混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物5uL混合1uL TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加3uLTU-6,在120v 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
在约1128bp位置出现扩增带,实验结果为阳性(如图)。
1.DL2000 Marker
2.标准阳性片段
【注意事项】
1.每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2.本试剂盒为20头份量诊断试剂,操作失误或移液器不准确造成终剂量不够情况,不予负责。
3.所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。
4.尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染,RNA抽提严格防止RNA酶污染,要求戴一次性塑料手套,并经常更换。
5.加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不、定时不准确造成无结果情况,不予负责。
6. 枪头、离心管和PCR管在使用前,好用DEPC水(0.1%)处理,然后高压灭菌后烘干,操作过程尽量不要用手接触,可用镊子夹取。
7.注意防止试剂污染,在有效期限前用完。
8. TU-8所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤。如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗。
【有效期】
本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面。
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猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒说明书(20次)
【注意】接到货后请认真阅读注意事项。
【用途】用于猪传染性胃肠炎病毒病的检测、诊断和流行病学调查。
【试剂】
编号
数量
保存
SR-I
8mL
4℃
SR-II
14mL
4℃
TU-1
250uL
-20℃
TU-2
20uL
-20℃
TU-3
20uL
-20℃
TU-4
20uL
-20℃
TU-5
500uL
-20℃
TU-6
60uL
-20℃
TU-7
25uL
4℃
TU-8
30uL
4℃
T
500 uL
-20℃
【操作步骤】
1.RNA提取
(1)取疑似猪传染性胃肠炎病毒病的病料(空肠、小肠及其内容物等),用Hank’s液或PBS研磨成1:3悬液,在-20 ℃反复冻融3次,经3 000 r/min离心5 分钟,上清液再经12 000 r/min离心15分钟,上清液-70 ℃保存备用。
(2)取200uL上清液(或标准品T),移入新的1.5mL灭菌EP管中,加入400uLSR-I,反复颠倒几次混匀,室温放置5~10分钟。
(3)加入200uL氯仿,漩涡振荡15秒混匀。室温下放置2~3分钟。
(4)12000r/min离心10分钟,取上层水相(注意:切勿吸取到里两相之间的杂质),转移到一个新的EP管中,再加入等体积异丙醇混匀,室温放置10分钟。
(5)12000r/min离心10分钟,弃去上清,加入SR-II 700uL,充分洗涤沉淀RNA后,12000r/min离心5分钟,小心吸去上清(注意:严格防止RNA丢失)。
(6)用洁净吸水纸吸干管壁的SR-II,室温放置2~3分钟。用20uLTU-5溶解,即为模板,即用或-70℃冻存备用。
2.One-Step RT- PCR加样体系
TU-1
12.5uL
TU-2
1uL
TU-3
1uL
TU-4
1uL
模 板
9.5uL
3.反应程序
第1步
50℃
45min
第2步
第3步
94℃预变性
94℃变性
5min
1min
第4步
58℃退火
1min
30个循环(3~5步)
第5步
72℃延伸
1min
第6步
72℃延伸
6min
第7步
4℃终止
5min
4.电泳
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5uL的TU-8混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物5uL混合1uL TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加3uLTU-6,在120v 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
在约1128bp位置出现扩增带,实验结果为阳性(如图)。
1.DL2000 Marker
2.标准阳性片段
【注意事项】
1.每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2.本试剂盒为20头份量诊断试剂,操作失误或移液器不准确造成终剂量不够情况,不予负责。
3.所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。
4.尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染,RNA抽提严格防止RNA酶污染,要求戴一次性塑料手套,并经常更换。
5.加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不、定时不准确造成无结果情况,不予负责。
6. 枪头、离心管和PCR管在使用前,好用DEPC水(0.1%)处理,然后高压灭菌后烘干,操作过程尽量不要用手接触,可用镊子夹取。
7.注意防止试剂污染,在有效期限前用完。
8. TU-8所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤。如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗。
【有效期】
本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面。