血清(浆)可直接测定。
红细胞:需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
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产品名称 |
规格 |
货号 |
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BAD Ab-112 Antibody |
详见说明 |
FS-S964277 |
仪器:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为550nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理:
注意事项
1.该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2.使用本仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
3.在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
测定步骤:
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:
① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。
测定步骤:
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
幼蚊细胞;C6/36 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤,PC-12细胞 HeLa 229(细胞)L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐L-Isoleucine t-butyl ester >98%,BR
喉癌上皮细胞;Hep-2L-谷氨酰胺(标准品)L-Glutamine HPLC≥98%,标准品
PRMT6 Others Human PRMT6 / HRMT1L6 细胞裂解液 (阳性对照) 谷胱甘肽(还原型)Glutathione (Reduced);GSH>98%,BR
犬肾细胞;MDCK(NBL-2)L-谷胱甘肽(标准品)Glutathione (Reduced)HPLC>98%,标准品,还原型
F3 Others Human Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 细胞裂解液 (阳性对照) 谷胱甘肽(氧化型)Glutathione(Oxidized)度大于98%,BR
非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2 癌细胞,MCF-7细胞 SPC-A-1(肺腺癌细胞)地美司钠美国进口Dimesna
卵巢畸胎瘤细胞;PA-1甲磺酸多拉司琼>98.5%,BRDolasetron mesylate
ICAM2 Others Human CD102 / ICAM2 细胞裂解液 (阳性对照) 地拉罗司,去铁斯若>99.0%Deferasirox
CM-H069膀胱平滑肌细胞完全培养基100mL地拉罗司(标准品)HPLC>98%,标准品Deferasirox
CPLX3 Others Human CPLX3 / Complexin 3 细胞裂解液 (阳性对照) 利培酮>98%,BR,Risperidone
SF9, 昆虫卵巢细胞 其它叠氮-赤-鞘氨醇美国进口Azido-erythro-sphingosine
CD19 Others Mouse 小鼠 CD19 / Leu-12 细胞裂解液 (阳性对照) DL-赤-二氢鞘氨醇美国进口DL-erythro-Dihydrosphingosine
滋养层绒毛细胞裂解物HVTLD-赤-二氢-D-鞘氨醇-1-1酸盐美国进口D-erythro-Dihydro-D-sphingosine-1-phosphate
IFNA8 Others Human Ierferon alpha-B / IFNA8 细胞裂解液 (阳性对照) 笼形D-赤-鞘氨醇-1-1酸盐美国进口Caged D-erythro-Sphingosine-1-phosphate
BALB/C小鼠肝上皮细胞;BNL 1ME A.7R.1L-(-)-葡萄糖(标准品)>98%,标准品L-(-)-Glucose
成纤维细胞培养基FM-sfTIBA2,3,5-三代本酸5克CP,99%
IL6ST Others Cynomolgus 食蟹猴 IL6ST / gp130 细胞裂解液 (阳性对照) 2-(4-叔丁基苯)-5-(... 2-(4-tert-Butylphenyl)-5-(4-biphenylyl... 15082-28-7 5G 通用试剂
类成纤维细胞系;CNLMG-B5538SKIN务二晴punum>98% Glutcronitnilq 244-13-8
F2-2细胞,5-8转基因鼻咽癌细胞系 小鼠色素瘤细胞,B16BL6细胞 CM-H047肝窦内皮细胞完全培养基100mLTOTALPROTEINCELLLYSISBUFFER蛋白细胞裂解缓冲液蛋白组学级透明无色液体COLDsigma
NRK-52E(大鼠肾小管导管上皮细胞) 5×106cells/瓶×21343-88-0硅酸载体 silicate
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