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凯斯科真菌毒素黄曲霉毒素B1检测试剂盒说明书

发布时间:2021/01/06 16:23:11 发布厂商:昆明诺金科技有限公司 >> 进入该公司展台

黄曲霉毒素B1检测试剂盒

凯斯科黄曲霉毒素B1检测试剂盒48T真菌毒素酶联免疫试剂盒

 

凯斯科真菌毒素黄曲霉毒素B1检测试剂盒说明书【货号】

C11011/C12011

 

【适用】

CASCO黄曲霉毒素检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测粮谷类,坚果类和饲料类样品中的黄曲霉毒素。

 

【检测原理】

CASCO黄曲霉毒素检测试剂盒以竞争性酶联免疫吸附检测法为基础。用甲醇/水震荡萃取粉碎样品中的黄曲霉毒素,过滤水相萃取物,然后进行免疫学检测。酶标抗原和标准或样品相继加入混合孔中,混匀后转移至测试孔,待黄曲霉毒素的抗体加入测试孔后反应开始。在10分钟的孵育过程中,样品及酶标记物中的黄曲霉毒素竞争结合连接在微孔上的抗体。然后倒掉孔中的溶液,洗掉微孔中未结合的黄曲霉毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液,所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。8分钟孵育后,加入停止液然后根据测试孔中的颜色深浅读取吸光度值,未知浓度样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较,就可以得到样品的黄曲霉毒素浓度。

 

【特异性】

CASCO黄曲霉毒素检测试剂盒不能区分各种黄曲霉毒素,但是能够不同程度的检测它们的存在,以下表格展示了其他黄曲霉毒素相对于黄曲霉素毒素B1的交叉反应率。

复合物

交叉反应率

黄曲霉毒素B2

25%

黄曲霉毒素G1

25%

黄曲霉毒素G2

4%

LOQ (*低定量限) 2ppb

 

【试剂及材料】

若试剂盒保存在2-8,未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。

  1. 包被抗体的微孔板(Microtiter te,测试孔)一块,真空包装带干燥剂
  2. 混合孔板(Mixing Wells)一块
  3. 5瓶浓度为02412.550 ng/mlppb)的黄曲霉毒素标准品(Aflatoxin Standard)。(注意:因为谷物样品在萃取过程中15稀释,标准溶液实际上为设定标准浓度的1/5,所以原样品的浓度无需校正)
  4. 1瓶黄曲霉毒素酶标记物(Aflatoxin Conjugate Solution)
  5. 1瓶黄曲霉毒素抗体(Aflatoxin Antibody Solution)
  6. 1瓶底物溶液(Substrate
  7. 1瓶停止液(Stop Solution)(注意:1N 盐酸,小心操作!)
  8. 110倍浓缩清洗液(10×Wash Solution
  9. 操作说明书
  10. 不同规格的试剂盒每种试剂对应体积如下:

货号

规格

标准

酶标

抗体

底物

停止液

清洗液

C11011

96T

2ml

12ml

8ml

14ml

14ml

50ml

C12011

48T

1ml

6ml

4ml

7ml

7ml

25ml

 

【注意事项】

  1. 每种试剂适用于CASCO 黄曲霉毒素试剂盒。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂,不同批次之间的试剂不可混用。
  2. 被稀释或污染的试剂及程序中未提及的样品种类都会导致结果失真。
  3. 不可使用过期试剂。
  4. 开始实验前试剂需回温于室温(20-28℃),但避免试剂在室温存放过久(>24小时)。
  5. 黄曲霉毒素为极毒物质,将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中,所有的实验器具必须在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小时,戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触,如果一旦接触,必须立即用大量水冲洗。
  6. 停止液为1N 盐酸,避免皮肤及黏膜接触,如果有溅出,立即清除并用大量水冲洗。

 

【所需材料】

试剂盒中不提供

  1. 感量0.01g的电子天平,小型粉碎机或碾钵
  2. 实验室用蒸馏水或去离子水
  3. 色谱级甲醇、氯化钠、氢氧化钠
  4. 量筒,100ml或者更大
  5. 用于萃取样品及收集萃取液的器皿
  6. 滤纸,Whatman GF/A及相当者
  7. 可吸取50ul和100ul容量的移液器及一次性吸头
  8. 可吸取50ul和100ul的八道移液器及一次性吸头
  9. 吸水纸
  10. 450nm的酶标仪
  11. 计时器

 

【样品提取液和清洗液的制备】

70%甲醇/

  1. 量取30ml的蒸馏水或去离子水并转移到带有盖子的干净玻璃容器内。
  2. 量取70ml的甲醇并加入转移到上述容器内。
  3. 盖紧盖子,充分混合,以备使用,但要防止挥发。

清洗液

10ml 10倍浓缩清洗液到90ml蒸馏水中混匀待用。

注:稀释好的清洗液可室温保存下次再用,注意不要污染。

 

【样品的准备】

  1. 粉碎好的样品过20目筛并在取样前充分混合,不立即分析的样品应放在冰箱中储存。
  2. 称取10g样品和1gNaCl至一有盖容器中。
  3. 量取50ml 70%的甲醇/水溶液与样品混合。
  4. 盖好盖子高速均质3分钟。(或涡旋震荡3分钟,或摇床震荡15-20分钟)
  5. 静置5分钟或4000转离心5分钟。
  6. Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤一定量的上清液,收集滤液到一干净容器中,待测。

注:如遇发酵类样品其提取后的滤液PH<6,需用一浓度的NaOH将滤液PH调至6-7之间,待测。

 

【检测程序】

注意标准及样品做平行试验,可以提高检测的准确度及度

  1. 开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
  2. 取适量的孔条固定在微孔板架上,未使用的孔条,放入密封袋中保存。
  3. 加入100ul的酶标记物到每个混合孔中。
  4. 再加入50ul的标准品及样品到相应混合孔中,用八道移液器在混孔中反复吸打4次混匀,然后转移100ul混合液到相应的测试孔;
  5. 加入50ul抗体到对应的每一个测试孔,室温下孵育10分钟。
  6. 倒掉微孔中溶液,微孔中注满清洗液,然后倒掉,重复3次,共四次洗板。
  7. *一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
  8. 每孔中加入100ul的底物溶液。
  9. 室温下孵育8分钟。(可根据颜色深浅适当延长缩短显色时间
  10. 每孔中加入100ul停止液。
  11. 450nm读吸光度值。

 

【结果判断】

以标准品浓度和标准/样品的吸光度值为基础,通过

Casco的Logit-Log计算软件计算出样品中黄曲霉毒素的含量。如果样品的吸光度大于*小标准的吸光度或小于*标准的吸光度,即可说明此样品中黄曲霉毒素的含量小于2ppb或大于50ppb,不能准确测出。

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