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ELISA温育的时间温度选择

来源: 上海博湖生物科技有限公司 >> 进入该公司展台 2023/04/25 10:22:24 已浏览:
导读:ELISA温育的时间温度选择

   在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加酶结合物和显色剂后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育(incubation),有人称之为孵育。

一、温育的时间选择

温育这一步是ELISA测定中*容易出现问题的步骤。目前国内ELISA试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟-1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1-2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。

ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有*贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应是需要一定时间的温育。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。

二、温育的温度选择

温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。

在建立ELISA方法作反应动力学研究时,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中*,以形成*多的沉淀。但因所需时间太长,在ELISA中一般不予采用。

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