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轩泽康生物带你手把手做实验(实验操作二)

来源: 上海轩泽康生物有限公司 >> 进入该公司展台 2023/04/13 15:26:47 已浏览:
导读:超详细的为您介绍酶联免疫吸附实验ELISA的实验所需试剂以及详细的步骤。做ELISA的同学快来学习吧~

酶联免疫吸附实验实验操作(二)

1:再每个EP管中加入150ul标准品稀释液,更换枪头后在1号管中加入150ul标准品。更换枪头并将EP管用混匀仪混匀5秒

2:在1号管中吸取150ul加入2号管中,更换枪头并将EP管用混匀仪混匀5秒。在2管中吸取150ul加入到3号管中,以此类推

3:【加样】:移液器调至50ul,标准品每个浓度点2个孔,每孔加入50ul。(加样过程中注意更换枪头)多道移液器调至40ul,样本孔中每孔加入40ul样本稀释液;更换10ul移液器和枪头,样本孔中每孔加入10ul样本(空白孔中不加入任何液体)(上海轩泽康生物温馨提示:加样时间尽量控制在15分钟之内完成,避免造成前后孔反应时差。)

4:【孵育及洗涤):封上封板膜并轻轻摇晃酶标板,标记项目及时间后置入37℃恒温箱中孵育30分钟。孵育结束后取出酶标板。

5:【洗涤】:将洗涤液倒入容器中,小心揭掉封板膜。弃去液体并在吸水纸上拍干。准备200ul多道移液器,每孔加200ul洗涤液,静置30秒后弃去液体。重复洗涤、静置、弃液步骤5次并拍干酶标板。

6:【加酶】:每孔加入酶标试剂50ul(空白孔除外),封上封板膜并轻轻摇晃酶标板,标记项目及时间后置入37℃恒温箱中孵育30分钟,孵育结束后取出酶标板。小心揭掉封板膜,弃去液体。

7:【洗涤】:每孔加200ul洗涤液,静置30秒后弃去。重复洗涤、静置、弃液步骤5次。在吸水纸上拍干剩余液体。

8:【显色】:将底物A、B分别倒入容器中.每孔加入50ul底物A,更换枪头后每孔加入50ul底物B。封上封板膜并轻轻摇晃酶标板,标记项目及时间后置入37℃恒温箱中避光孵育10分钟.孵育结束后取出酶标板。小心揭掉封板膜。

此时酶标板应有成梯度的可见色差

9:【终止】:终止液倒入容器中,每孔加终止液50ul进行终止反应。此时酶标板内液体由蓝色转变为黄色,轻轻摇晃酶标板后待用。

10:【测定读数】:酶标板放入酶标仪进行检测,以空白孔调零450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)

测定应在加终止液后15分钟以内进行。轩泽康生物带你手把手做实验(实验操作二)

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