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一抗: 可以特异结合底物,就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。
一抗的选择要点:
1. 一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对低;而多克隆抗体特异性弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可通过封闭来避免)。
2. 抗体的比例可依据抗体说明书或western blot的抗体比例来做即可。3. 对于组织样本,一般要在37℃孵育1-2h 或4℃冰箱孵育*(效果*,且拿出后需37℃复温45min),并保持湿盒里的湿度来防止抗体蒸发。对于难以着色的,在第二天还需将湿盒置于室温孵育。
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