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ELISA常用的四种测定方法

来源: 上海抚生实业有限公司 >> 进入该公司展台 2021/06/22 10:16:40 已浏览:
导读:ELISA常用的四种测定方法

ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序,通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上,再加入一级检测抗体(primarydetection Ab),形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate),作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系,依此原理计算出样本中的抗原量或浓度。

1.直接法(direct ELISA)

将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原量,此一级抗体的特异性非常重要。

优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。

缺点:试验中的一抗都得用酶标记,但不是每种抗体都适合做标记,费用相对提高。

2.间接法(indirect ELISA)

此测定方法与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

优势:二抗可以加强信号,而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它多的免疫反应性。

缺点:交互反应发生的机率较高。

3.双抗体夹心法(sandwich ELISA)

被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。

优势:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化。

缺点:抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

4.竞争法(competitive ELISA)

样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体,当样品里的自由抗原越多,就可以结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗步骤,洗去自由抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较,根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。

优势:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。

缺点:整体的敏感性和专一性都较差。























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