一、乾思关于0225-02Sp细胞细胞株的声明

0225-02Sp细胞 。上海乾思生物公司细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制，在大陆努力搭建正牌细胞与国内广大科研人员之间的沟通桥梁。为您0225-02Sp细胞外，还有更多相关实验产品，标准品，细胞株和实验技术服务等等前期后续服务。

  市面上的0225-02Sp细胞“李鬼”细胞荼毒科研，科学家指出被污染细胞系使生物医学遭受严重损失，细胞的身份至关重要。

二、购买上海乾思生物0225-02Sp细胞注意事项--（乾思生物）发布

2.1 客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；

收到0225-02Sp细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。

2.2 如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

  注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。

2.3 细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

  （1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；

  （2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；

  （3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；

  （4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；

  （5）视具体情况而定。

2.4 细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

  （1）客户造成细胞污染，不重发；

  （2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

  （3）细胞状态不好，未细胞培养前3天照片的，不重发；

  （4）细胞培养时经其它处理的，不重发；

  （5）细胞收到2天内，未告知，不重发；

  （6）视具体情况而定。

三、0225-02Sp细胞培养中的黑胶虫污染问题的处理

有同学在实验中反馈给我们说到：

我们实验室近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行培养也没发现问题。同时培养箱也有本实验室保存的3t3细胞进行培养，生长快，很快铺满，仔细观察也可以见到少量的黑点。后来还有从军科过来的Hela细胞，没有使用我们的血清，直接吸出多余的培养液后，进行培养，传代后用原来吸出的培养液进行培养，同样发现了问题。

黑焦虫的特点：

1、与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则多。

2、对抗生素无效。

3、可能通过培养箱空气进行污染。

4、单用培养液及血清培养没发现问题。

5、 换掖冲洗后也无效。

以下是论坛里我找来的相关帖子内容。“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。目前比较的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题

关于是什么的问题的讨论：

1、玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西(曾经有文献报道过)。

2、据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好象也没个统一的说法。

3、据病毒所和军科鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。

4、有人说是纳米级的细菌。

其他的特点：

1、形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米。

2、在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动(不规则的原地小距离抖动)。

3、细胞内好像也有存在。

4、但并不引起培养液混浊。

5、时间稍长，细胞状态明显恶化，并后死亡。

大家的处理：

1、换好一点的血清(我觉着和血清的关系不大)。

2、如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞，这种细胞不分裂，过一阵就死掉了，做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道)。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。

3、换用进口的一次性塑料培养瓶。

4、建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏。

5、在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。

6、有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。

黑焦虫很难根除，好的办法就是舍弃并进行全面的熏蒸杀菌我们实验室也污染了一次，后来熏蒸了一个星期，换气也用了1个星期，后来就好了，期间我也用什么换血清等方法弄过，不过作用不大，过几天那个又多了。呵呵，还是的消毒一次好啊。

我养的人的肝细胞也出现类似上面楼主说的“黑胶虫”。自己的观察和楼主还是有点区别：我用条件培养基(不含血清和二抗)长期培养细胞，每两天就更换，新配的培养基。在培养一个星期就出现类似“黑胶虫”的东西。胞浆和上清中均有那种东西，换液以后好像澄清了一点，第二天又出现了，这东西对细胞的生长也有些影响，细胞有的脱落死掉了。因为培养时间不久，还不知道是细胞在培养的过程中本身的原因还是黑胶虫的的影响。可以肯定可以和细胞共生。奇怪的是：我在用含血清(PAA公司小牛血清)培养基作对照的六孔板中发现，那上清中却是澄清的，三个复孔也是澄清的。1.当时怀疑是我是不是没加二抗的原因，后在条件培养基中加入二抗以后，发觉效果还是不明显。2.怀疑是不是条件培养基本身就含有那东西，于是将一部分培养基也放入培养瓶中培养。也没发现有那东西。

后个人的结论：这种东西在可能本身就寄生于人和动物的细胞内。二抗对其效果不明显。血清中可能存在有一种物质可以抑制其生长。细胞离开特有的免疫环境，很多被抑制生长的，寄生于细胞内的生物就开始生长，这种情况类似于HIV感染引起的感染一样。解决的办法也是很迷漫。至今也没什么办法。在和战友们的的交流和学中找到对付这种黑胶虫的办法。

有关血清使用中的常见问题解答。数十年来我们始终面临的是同样的问题。因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考：

1、保存血清好的办法?

我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。若你一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2、如何解冻血清才不会使产品质量受损?

我们建议您将血清从冷冻箱中取出后，先置于2-8℃冰箱中使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

关于细胞培养还有很多问题需要解答，怎么办？

欢迎咨询，为你排忧解难！

四、0225-02Sp细胞售后服务政策

  Acris、 abcam、cst、Biorbyt、santa、Novus、sigma、lifespan、NEB、roche、ABI、R&D millipore、BD、Qiagen Cayman、Jackson Life、GeneTex、Bio-Rad DSHB、tocris、peprotech 等；部分产品现货，低比价，另常备、Trizol、DMSO、lipo2000、lipo3000、SC-2004、SC-2005常备现货 ；货期短，价格优，售后齐全。

  0225-02Sp细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。

  需要客户0225-02Sp细胞细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表。

  如用户收到细胞8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司将优惠价重新一株原细胞

  0225-02Sp细胞质量可靠，售后有保障

  我库细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制。

  冻存细胞时间为5-7个工作日，活细胞为7-15个工作日。

  由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解0225-02Sp细胞相关细胞价格及详细资料请老师告诉我们，对您造成的不便还请见谅！

  （BY WHY）