一、乾思关于0225-02Sp细胞细胞株的声明

0225-02Sp细胞 。上海乾思生物公司细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制，在大陆努力搭建正牌细胞与国内广大科研人员之间的沟通桥梁。为您0225-02Sp细胞外，还有更多相关实验产品，标准品，细胞株和实验技术服务等等前期后续服务。

  市面上的0225-02Sp细胞“李鬼”细胞荼毒科研，科学家指出被污染细胞系使生物医学遭受严重损失，细胞的身份至关重要。

二、购买上海乾思生物0225-02Sp细胞注意事项--（乾思生物）发布

2.1 客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；

收到0225-02Sp细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。

2.2 如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

  注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。

2.3 细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

  （1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；

  （2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；

  （3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；

  （4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；

  （5）视具体情况而定。

2.4 细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

  （1）客户造成细胞污染，不重发；

  （2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

  （3）细胞状态不好，未细胞培养前3天照片的，不重发；

  （4）细胞培养时经其它处理的，不重发；

  （5）细胞收到2天内，未告知，不重发；

  （6）视具体情况而定。

三、原代【0225-02Sp细胞】培养之扫雷行动

错误1：一小管原代0225-02Sp细胞在水浴中解冻一段时间

纠正1：原代0225-02Sp细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。

错误2：解冻match小瓶后直接离心原代0225-02Sp细胞

纠正2：我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

错误3：允许原代细胞变得过于融合

纠正3：当生长至100％汇合时，原代细胞可以变得衰老。记住，原代细胞不是100％纯，因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95％融合时，对原代细胞进行传代培养。

错误4：传代原代0225-02Sp细胞时过度胰蛋白酶消化

纠正4：当细胞传代时，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

错误5：原代0225-02Sp细胞可以很容易地重新冻存

纠正5：通常我们不重新冻存原代0225-02Sp细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

错误6：原代0225-02Sp细胞可以无限的增殖

纠正6：与细胞系不同，原代0225-02Sp细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞（如成纤维细胞）可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。

错误纠正后就该步入正轨啦——

应如何进行冻存细胞的培养？

下列步骤以单管冻存细胞进行培养的实验方案为例。

准备一烧杯37°C的水。

从液氮储存中取出一管细胞，注意保护手和眼睛。

拧松管盖1/4圈，等待10秒钟以释放螺纹中可能残留的液氮，再重新拧紧管盖。

将冻存管的下半部分置于37°C水浴中进行解冻，直至冻存管内仅剩余一小块冰芯，使细胞迅速解冻。

用消毒液擦拭管体外表面，再将其移至II级A型层流细胞培养通风橱中。

打开管盖，使用1 mL移液器上下吹打细胞悬液以分散细胞。

从管中吸取20 uL细胞悬液，并将其稀释于20 uL台盼蓝溶液中（如：Gibco?台盼蓝，货号 15250-061）。

使用血细胞计数板来确定每毫升悬液中的活细胞数。

将管中悬液（1 mL）稀释至产品说明中的浓度（例如1.25 x 10E4活细胞/毫升，Gibco? 新生人表皮角质形成细胞）。

将5 mL细胞悬液加入25 cm2培养瓶，或将15 mL细胞悬浮液加入75cm2培养瓶中。

摇匀培养瓶中的培养基以分散细胞。许多类型的细胞都会迅速贴壁，如果没有在传代后即刻摇匀细胞，细胞可能生长不均匀。

在37°C、5% CO2/95%空气、湿度细胞培养箱中培养细胞。为了获得佳结果，培养开始后至少在24小时之内不要扰动细胞。

是否可以对扩增后的0225-02Sp细胞重新冻存？如果可以该如何操作？

当从乾思购买了冻存或正处于增殖期的细胞，可对其进行扩增和重新冻存。不过，冻存操作可能会对细胞的生长状态有所影响。下列实验方案为大家提供了一份培养基冻存细胞的基础指南。

请注意：由于冻存设备与个人技术之间的差异，我们无法确保使用本方案冻存的细胞在复苏后能够保持活力，我们也无法为研究用户实验室冻存细胞的效果进行担保。

使用37°C水浴化冻培养基或4°C条件下过一个晚上进行化冻。

如果在水浴中进行化冻，请确保温度不要过37°C，也勿将该产品延长时间置于37°C。

培养基在使用前应置于4°C条件下平衡。为获得优结果，大家使用能够控制变温速率的冰箱。如果缺少能够控制变温速率的冰箱，也可使用细胞冻存盒。

如需用酶试剂解离培养器皿表面的细胞，则需使用对应的终止溶液重悬细胞以中和酶的效果。

通过离心沉淀0225-02Sp细胞。

去除上清液后，使用预冷的培养基以5x10E5至3x10E6细胞/毫升的密度重悬细胞。

将细胞悬液分装至合适数量的冻存管中。

将细胞尽快冷却至4°C。

如果使用控制变温速率的冰箱：以每分钟降低1°C的速率冰冻样品，直至–40°C。之后按照每分钟降低2°C的速率降至–90°C左右。

如果使用细胞冻存盒：请按照说明书来准备冻存盒。

为获得佳结果，大家在细胞温度降至–80°C后，尽快将冻存管转移至液氮储存设备的气相中。

作为培养基的替代品，可使用该冻存细胞的基础培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和10% DMSO进行细胞冻存。请注意不将培养基用于人表皮黑素细胞的冻存操作。

乾思生物科技实验室温馨提醒：

组织块贴壁法分离细胞时：注意组织块贴壁2-3h后，补液时沿壁轻轻加入培养基，防止组织块漂浮。

关于细胞培养还有很多问题需要解答，怎么办？

欢迎咨询，为你排忧解难！

四、0225-02Sp细胞售后服务政策

  Acris、 abcam、cst、Biorbyt、santa、Novus、sigma、lifespan、NEB、roche、ABI、R&D millipore、BD、Qiagen Cayman、Jackson Life、GeneTex、Bio-Rad DSHB、tocris、peprotech 等；部分产品现货，低比价，另常备、Trizol、DMSO、lipo2000、lipo3000、SC-2004、SC-2005常备现货 ；货期短，价格优，售后齐全。

  0225-02Sp细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。

  需要客户0225-02Sp细胞细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表。

  如用户收到细胞8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司将优惠价重新一株原细胞

  0225-02Sp细胞质量可靠，售后有保障

  我库细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制。

  冻存细胞时间为5-7个工作日，活细胞为7-15个工作日。

  由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解0225-02Sp细胞相关细胞价格及详细资料请老师告诉我们，对您造成的不便还请见谅！

  （BY WHY）