黄曲霉毒素B1检测试剂盒

【货号】

C11011/C12011

【适用】

CASCO黄曲霉毒素检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测粮谷类，坚果类和饲料类样品中的黄曲霉毒素。

【检测原理】

CASCO黄曲霉毒素检测试剂盒以竞争性酶联免疫吸附检测法为基础。用甲醇/水震荡萃取粉碎样品中的黄曲霉毒素，过滤水相萃取物，然后进行免疫学检测。酶标抗原和标准或样品相继加入混合孔中，混匀后转移至测试孔，待黄曲霉毒素的抗体加入测试孔后反应开始。在10分钟的孵育过程中，样品及酶标记物中的黄曲霉毒素竞争结合连接在微孔上的抗体。然后倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未结合的黄曲霉毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。8分钟孵育后，加入停止液然后根据测试孔中的颜色深浅读取吸光度值，未知浓度样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较，就可以得到样品的黄曲霉毒素浓度。

【特异性】

CASCO黄曲霉毒素检测试剂盒不能区分各种黄曲霉毒素，但是能够不同程度的检测它们的存在，以下表格展示了其他黄曲霉毒素相对于黄曲霉素毒素B1的交叉反应率。

LOQ (*低定量限) 2ppb

【试剂及材料】

若试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。

1. 包被抗体的微孔板（Microtiter te,测试孔）一块，真空包装带干燥剂
2. 混合孔板（Mixing Wells）一块
3. 5瓶浓度为0、2、4、12.5、50 ng/ml（ppb）的黄曲霉毒素标准品（Aflatoxin Standard）。（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准溶液实际上为设定标准浓度的1/5，所以原样品的浓度无需校正）
4. 1瓶黄曲霉毒素酶标记物(Aflatoxin Conjugate Solution)
5. 1瓶黄曲霉毒素抗体（Aflatoxin Antibody Solution）
6. 1瓶底物溶液（Substrate）
7. 1瓶停止液（Stop Solution）（注意：1N 盐酸，小心操作！）
8. 1瓶10倍浓缩清洗液（10×Wash Solution）
9. 操作说明书
10. 不同规格的试剂盒每种试剂对应体积如下：

【注意事项】

1. 每种试剂适用于CASCO 黄曲霉毒素试剂盒。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。
2. 被稀释或污染的试剂及程序中未提及的样品种类都会导致结果失真。
3. 不可使用过期试剂。
4. 开始实验前试剂需回温于室温（20-28℃），但避免试剂在室温存放过久（＞24小时）。
5. 黄曲霉毒素为极毒物质，将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的实验器具必须在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小时，戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触，如果一旦接触，必须立即用大量水冲洗。
6. 停止液为1N 盐酸，避免皮肤及黏膜接触，如果有溅出，立即清除并用大量水冲洗。

【所需材料】

试剂盒中不提供

1. 感量0.01g的电子天平，小型粉碎机或碾钵
2. 实验室用蒸馏水或去离子水
3. 色谱级甲醇、氯化钠、氢氧化钠
4. 量筒，100ml或者更大
5. 用于萃取样品及收集萃取液的器皿
6. 滤纸，Whatman GF/A及相当者
7. 可吸取50ul和100ul容量的移液器及一次性吸头
8. 可吸取50ul和100ul的八道移液器及一次性吸头
9. 吸水纸
10. 450nm的酶标仪
11. 计时器

【样品提取液和清洗液的制备】

70%甲醇/水

1. 量取30ml的蒸馏水或去离子水并转移到带有盖子的干净玻璃容器内。
2. 量取70ml的甲醇并加入转移到上述容器内。
3. 盖紧盖子，充分混合，以备使用，但要防止挥发。

清洗液

取10ml 10倍浓缩清洗液到90ml蒸馏水中混匀待用。

注：稀释好的清洗液可室温保存下次再用，注意不要污染。

【样品的准备】

1. 粉碎好的样品过20目筛并在取样前充分混合，不立即分析的样品应放在冰箱中储存。
2. 称取10g样品和1gNaCl至一有盖容器中。
3. 量取50ml 70%的甲醇/水溶液与样品混合。
4. 盖好盖子高速均质3分钟。（或涡旋震荡3分钟，或摇床震荡15-20分钟）
5. 静置5分钟或4000转离心5分钟。
6. 用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤一定量的上清液，收集滤液到一干净容器中，待测。

注：如遇发酵类样品其提取后的滤液PH<6,需用一浓度的NaOH将滤液PH调至6-7之间，待测。

【检测程序】

注意标准及样品做平行试验，可以提高检测的准确度及度

1. 开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
2. 取适量的孔条固定在微孔板架上，未使用的孔条，放入密封袋中保存。
3. 加入100ul的酶标记物到每个混合孔中。
4. 再加入50ul的标准品及样品到相应混合孔中，用八道移液器在混合孔中反复吸打4次混匀，然后转移100ul混合液到相应的测试孔；
5. 加入50ul抗体到对应的每一个测试孔，室温下孵育10分钟。
6. 倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后倒掉，重复3次，共四次洗板。
7. *一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
8. 每孔中加入100ul的底物溶液。
9. 室温下孵育8分钟。（可根据颜色深浅适当延长缩短显色时间）
10. 每孔中加入100ul停止液。
11. 450nm读吸光度值。

【结果判断】

以标准品浓度和标准/样品的吸光度值为基础，通过

Casco的Logit-Log计算软件计算出样品中黄曲霉毒素的含量。如果样品的吸光度大于*小标准的吸光度或小于*标准的吸光度，即可说明此样品中黄曲霉毒素的含量小于2ppb或大于50ppb，不能准确测出。