黄曲霉毒素B1免疫亲和柱
Casco FastSep AFB1 货号：C15001
简介
Casco FastSep AFB1免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1检测的净化。可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA的定量分析，适用于谷物，食品，饲料等的样品净化过程。
柱容量 ≥300ng 黄曲霉毒素B1
储存条件 2-8℃冷藏保存，不可冷冻
1 用途
用于实验室净化样品提取物以进行进一步分析
2 概要
黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的霉变菌，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物。污染粮食、油料作物的种子，其中以花生、玉米*易被污染，另外在小麦、高粱、巴西坚果、豆类和大米等重要粮食中也经常被检出。
黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因，也是胃癌，肠癌等疾病的主要原因，对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品，饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
3 原理
测定的基础是抗原抗体反应，免疫亲和柱中含有和黄曲霉毒素B1抗体结合在一起的凝胶，样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉B1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内黄曲霉毒素B1与抗体结合，其他的无关物质不会结合而直接通过免疫亲和柱，之后洗涤免疫亲和柱完全除去没有被结合的其他无关物质。*加入甲醇将黄曲霉毒素B1释放，然后注入到分析仪器中进行检测。
4 提供的试剂
l 20支/盒免疫亲和柱，规格：3ml
l 说明书
5 操作者应注意事项
l 黄曲霉毒素B1对人体有害，应戴手套操作。
l 使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液*用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡*。
l 不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
l 亲和柱于2-8℃冷藏保存，不可冷冻
l 使用前，免疫亲和层析柱需回至室温（22-25℃）
6 操作流程
l 粉碎好的样品过20目筛并在取样前混合，不立即分析的样品应放在冰箱中储存。
l 称取20g粉碎样品及4g氯化钠，加入100ml 70%甲醇/水。
l 高速均质约2分钟，或震荡器震荡约30分钟。
l 过滤样品至少10ml。
l 取10ml滤液加入20ml水*，混合。
l 用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取15ml（相当于1g样品）准备加入到免疫亲和柱中过柱。
l 将10ml注射器连接于免疫亲和柱上端。
l 处理好的样品液15ml以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。
l 加10ml水淋洗柱子两次，弃掉流出的液体。
l 利用真空设备压入空气或用注射器吹干柱中水。
l 加入1ml甲醇缓慢洗脱，流速约为2-3秒每滴。
l 收集全部洗脱液于干净的比色皿或其他容器中用于检测。
*粮谷类样品用水稀释，发酵类或杂质干扰很大的样品提取液，则用20mMPBS进行更大倍数的稀释（一般为10倍），以确保亲和柱中黄曲霉毒素抗体与样品提取液中抗原特异性结合的能力不受影响。
20mMPBS：0.62g NaH2PO4•2H2O + 5.73g Na2HPO4•12H2O+9g NaCl，蒸馏水溶解并定容至1000ml，调PH至7.4。
7 操作流程图
8 液相色谱测定条件
l 激发/发射波长：360nm/440nm
l 流动相：甲醇-水（45+55）
l 流速：1mL/min
l 进样量：20ul
l 柱温：30°C
l 反应时间：10min
用进样器吸取20mL黄曲霉毒素标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素B1标准溶液高效液相色谱图。
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