资讯

INFORMATION

您现在的位置::首页 > 资讯管理 > 行业要闻 > 行业百态

PCR反应循环参数

来源: 上海抚生实业有限公司 >> 进入该公司展台 2022/11/03 10:57:16 已浏览:
导读:PCR反应循环参数

PCR反应循环参数:

1.预变性

模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否*至关重要,建议加热时间参考试剂说明书,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。

2.变性步骤

循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不,易造成扩增失败。

3.引物退火

退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。

4.引物延伸

引物延伸一般在72℃进行(Taq酶合适温度)。但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定,一般在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。

5.循环数

大多数PCR含25-35循环,过多易产生非特异扩增。

6.zui后延伸

在zui后一个循环后,反应在72℃维持10-30分钟.使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链。

  • 关注本网官方微信公众号 随时阅读专业资讯

  • 征稿邮箱:info@testmart.cn

版权与免责声明

  • 凡本网注明“来源:仪器仪表交易网”的所有作品,均为仪器仪表交易网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:仪器仪表交易网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
  • 本网转载并注明自其它来源(非仪器仪表交易网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。

爆品推荐

推荐资讯

首页| 关于我们| 联系我们| 友情链接| 广告服务| 会员服务| 付款方式| 意见反馈| 法律声明| 服务条款