一、ELISA加样步骤

  在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡,可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。

  制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、血块收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。

  一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，过一周测定的需低温冰存。可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液、分泌物和排泄物等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份，ELISA试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。

二、固相载体

  加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴，以发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。

  良好的仪器和准确的操纵是保证ELISA试剂盒检测结果正确可靠的必要条件。ELISA顶用的蒸馏 水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定，有些则需经预处理。

三、标本因素

  血清标本可按常规方法采集，应留意避免溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。

  如在冰箱中保留过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。本文将叙述板式ELISA各个操纵步骤的留意要点，国外试剂均与特殊仪器配合应用，严格遵照划定操纵，必能得出正确的结果。

  加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不可溅出，不可产气愤泡。有此测定需用稀的血清，可在试管中按划定的稀释度稀释后再加样。