细胞冻存流程如下：

一、贴壁细胞冻存流程：

1、将胰酶、培养基提前37度预热；冻存液提前配好放到4度冰箱预冷；
2、先将装有细胞的方瓶从培养箱拿出，用酒精喷洒瓶身后将摇瓶拿进净台；
3 、打开方瓶瓶盖，将方瓶中的培养基倒干净；
4、根据细胞消化难易程度添加适量的胰酶；T25方瓶加1 ml胰酶,T75方瓶加2ml胰酶；
5、 根据细胞消化难易程度放入37度培养箱消化1-5 min，知道看见大片的细胞开始脱落，要及时终止消化；
6、 终止培养基需要含有至少10%血清，通常终止比例为1:10（1ml胰酶需要加入10 ml终止培养基），对胰酶比较敏感的细胞需要终止后离心后换新鲜的培养基；
7、 终止后将细胞轻轻吹打混匀，避免结团，细胞收集到15 ml或者50 ml离心管中，将离心管配平，放入离心机中1000 rmp5分钟；
8、 将离心管从离心机中取出，用酒精喷洒后拿进净台；
9、弃掉离心管中上清，加入预冷的冻存液，吹打混匀；

10、 将混匀的细胞加入冻存管中；
11、将冻存管放入冻存盒中，蕞后放入-80°冰箱；
12、 第二天把细胞转移至液氮；

二、悬浮细胞冻存流程：
1） 先将装有细胞的摇瓶从培养箱拿出，用酒精喷洒瓶身后将摇瓶拿进净台；
2） 打开摇瓶瓶盖，取适量细胞放入50 ml离心管或15 ml离心管中；
3） 将离心管配平，放入离心机中1000 rmp5分钟；
4） 将离心管从离心机中取出，用酒精喷洒后拿进净台；
5） 弃掉离心管中上清，加入提前预冷的冻存液，吹打混匀；
6） 将混匀的细胞加入冻存管中；
7） 将冻存管放入冻存盒中，蕞后放入-80°冰箱；
8） 第二天把细胞转移至液氮；