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闵行区

更新时间
2024-03-15 14:52:07

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    关键词:1 ClickChemistry Inc蛋白、抗体及相关试剂
    简介:我公司代理,华东地区代理1 ClickChemistry Inc蛋白、抗体及相关试剂经营进口胎牛血清、细胞因子、ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA实验等。
    代理,华东地区代理1 ClickChemistry Inc蛋白、抗体及相关试剂产品涉及分子生物学、细胞生物学、菌学、遗传学、生物化学、蛋白质学、细胞疗、临床应用等领域。代理,华东地区代理范围内免费运输,如出现运输质量问题,我们可以包退换货。1 ClickChemistry Inc蛋白、抗体及相关试剂完善的库存及供应体系以及高效稳定的纯化技术,保证产品均能现货供应和产品质量的稳定性。
    名称: 1 ClickChemistry Inc蛋白、抗体及相关试剂
    域名名:1 ClickChemistry Inc
    【生物分子】 抗真菌素 维生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖类 白三烯 前列腺素 药结合物 抗氧化剂 药理活性化合物 类固醇素结合物 半抗原反应 半抗原载体结合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 亲和素/链霉亲和素
    【蛋白质/抗原/多肽】 球蛋白 封闭肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 细胞质蛋白 蛋白 膜蛋白 核蛋白 细胞裂解和提取物 线粒体蛋白 细胞裂解 组织提取 重组细胞因子 
    【常用生化试剂】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物学缓冲液 蛋白生化缓冲液 去垢剂 染色试剂 溶剂 酸碱 化学试剂 其它生化试剂
    【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR试剂 PCR对照 特异性PCR试剂盒 PCR克隆试剂盒 RNA 载体及构建 PCR克隆载体 M13克隆载体 菌克隆载体 文库及构建 cDNA文库 基因组文库 噬菌体展示文库
    【酶】限制性内切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 连接酶
    【cDNA及合成纯化】cDNA全长基因 RNA cDNA合成 cDNA相关试剂
    【核酸/蛋白合成】Oligo纯化 核酸合成柱 核酸合成试剂
    【克隆与表达】克隆基因 克隆试剂盒 克隆筛选
    【表达分析】 Northern印迹分析 分支DNA和mRNA定量
    【蛋白分析】 PAGE凝胶制备 蛋白电泳试剂 预制蛋白凝胶
    【核酸纯化】 DNA凝胶纯化 DNA提取纯化 PCR产物纯化
    【RNAi技术】 siRNA 反义寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文库
    【蛋白检测】 Western印迹 报告基因检测 蛋白检测试剂盒
    【实验动物】 转基因动物 小鼠 大鼠 模式动物
    【临床检测试剂】 生化检测 遗传学检测 血液检测
    【相关检验试剂】 食品检测 药品检测
    【蛋白纯化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白稳定
    【细胞培养】 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞 细胞株 感受态细胞 新鲜细胞分离
    【干细胞】 干细胞/祖细胞 原代细胞 干细胞培养基
    【蛋白修饰】 蛋白标记 载体蛋白结合 其它
    【细胞生物学检测】 细胞凋亡 细胞分离 细胞增殖
    【筛选】 荧光素细胞活力/增殖/毒性检测
    【检测】 放射性检测 化学发光检测
    【检验原理】
    试剂盒组成及试剂配制
    1.        酶联板:一块(96孔)
    2.        标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1,600 pg/ml,将其稀释为400 pg/ml后,再做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别稀释成400 pg/ml,200 pg/ml,100 pg/ml,50 pg/ml,25 pg/ml,12.5 pg/ml,6.25 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。如配制200 pg/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 400 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
    3.        样品稀释液:1×20ml。
    4.        检测稀释液A:1×10ml。
    5.        检测稀释液B:1×10ml。
    6.        检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
    7.        检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
    8.        底物溶液:1×10ml/瓶。
    9.        浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
    10.    终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
    11.    覆膜:5张
    自备物品
    1.   酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)
    2.   微量加液器及吸头,EP管
    3.   蒸馏水或去离子水,全新滤纸
    标本的采集及保存
    1.        血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    2.        血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    3.        其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    4.        样本处理:血清或血浆标本稀释5,000倍。
    注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应过1个月,-80℃不应过2个月;标本溶血会影响*后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。 
    操作步骤
    实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
    1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
    2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
    3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
    4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
    5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
    6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
    7.        依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
    8.        用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后立即进行检测。
    注:
    1.  试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
    2.   加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,使用多道移液器加样。
    3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
    4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
    5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
    6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
    7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
        建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
        如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
    洗板方法
    1.  手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。
    2.  自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
     ◇      注意事项:
    收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分标本需添加抑肽酶。
    ◇      液体类标本
    标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。
    ◇      血清:
    室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
    ◇      血浆:
    应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
    ◇      尿液、胸腹水、脑脊液:
    用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
    ◇      细胞培养上清:
    检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    ◇      组织标本:
    切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
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